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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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原理
原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細胞內待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。
經特定標記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交，然后顯示標記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質的mRNA在胞質中的表達。
1、組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養(yǎng)細胞在30 min 內固定。
2、細胞組織固定目的與注意事項：
（1）保持細胞結構；
（2）大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；
（3）使探針易于進入細胞或組織。
常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑不同，多聚甲醛不會與蛋白質產生廣泛的交叉連接，因而不會影響探針穿透入細胞或組織。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復合物，AD與BD會在空間上充分接近，重新構成結構域，啟動報告基因的轉錄。擁有BD質粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長，RNA原位雜交技術服務，擁有AD質粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長，通過接合（mating）或共轉化使酵母同時擁有AD與BD質粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長，并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉錄。
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第3年
