生物組織石蠟包埋切片是組織學(xué)切片技術(shù)中應(yīng)用廣泛的方法。 例如(hematoxylin;h(a)ematine )— 伊紅染色法 (
hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。(hematoxylin;h(a)ematine )染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中基本、使用廣泛的技術(shù)方法。
石蠟包埋切片實(shí)驗(yàn)基本步驟主要有以下幾步:
1、取材:新鮮組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出在通風(fēng)櫥內(nèi)用手術(shù)刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒內(nèi)。
2、脫水:將脫水盒放進(jìn)吊籃里于脫水機(jī)內(nèi)依次梯度酒精進(jìn)行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-I5-10min-II5-10min-蠟I1h-蠟II1h-蠟III 1h。
3、包埋:將浸好蠟的組織于包埋機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟?zāi)讨皩⒔M織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺(tái)冷卻,蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。
4、切片:將修整好的蠟塊置于石蠟切片機(jī)上切片,片厚4μm。切片漂浮于攤片機(jī)40℃溫水上將組織展平,用載玻片將組織撈起,并放進(jìn)60℃烘箱內(nèi)烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存?zhèn)溆谩?/p>
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