外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割,故較為穩(wěn)定,同時借助膜形成三聚體,具有很強的誘導細胞凋亡的活性。而且,人們認為外泌體的轉運TNF家族蛋白,與各種炎1癥疾病和自身免1疫疾病的產生相關。
例如,組織外泌體提取技術服務,從類風1濕關1節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞中釋放出來的外泌體上,聚集高濃度的膜結合型TNF-α,會加重類風1濕關1節(jié)炎病情。
樣本準備
1. 提供外泌體懸液即可,未純化樣本也可以上機檢測;
注意:NTA僅提供粒徑分布情況和顆粒濃度,無法區(qū)分外泌體與非外泌體成分;當然也可先利用外泌體特異性標記物進行熒光標記,則可以獲知外泌體特定亞群的含量。
2.儀器的檢測區(qū)間是10^7 particles/ml,且有濃度檢測下限,為10^5 particles/ml,進樣量不少于2ml;一般來說,會對樣本稀釋后進樣;
我司無法準確建議送樣量;檢測需要量與樣本本身濃度有關,樣本濃,則用量小,反之則多,根據(jù)檢測經(jīng)驗,樣本取用量一般在2μl-100μl不等,取用量大于50μl時大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對樣本有過多稀釋。一般建議送樣量不低于30μl,如樣本珍貴,可聯(lián)系我司寄回,運費視具體情況收取。
國際細胞外囊泡學會(ISEV) 在2014年的提議,對于提取獲得的外泌體,需要通過以下手段進行確認:
雙層囊膜結構是外泌體重要標志之一,但普通光學顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結構。而透射電子顯微鏡 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可達0.1 ~ 0.2 nm,可將被觀察物體放大至數(shù)百萬倍,非常適合進行外泌體雙層囊膜超微結構觀測。
表觀生物技術團隊擁有豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經(jīng)驗,可為客戶提供高質量外泌體TEM檢測服務,獲得樣本中外泌體典型形態(tài)特征圖片 (如圖一)。
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