將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
(2) 用無(wú)菌牙簽將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上,再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種(或打點(diǎn))。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。
(3) 倒置平板,于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長(zhǎng)到0.5-1.0mm的寬度。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個(gè)以上的不對(duì)稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
(6) 裂解細(xì)菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
tunel流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)通常稱為細(xì)胞程序性死1亡,是由基因控制的主動(dòng)性細(xì)胞死1亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞凋亡與多種疾病密切相關(guān),如癌細(xì)胞具有連續(xù)增殖、抵抗細(xì)胞凋亡能力,利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡可為腫1瘤診斷,療1效評(píng)價(jià)和預(yù)后預(yù)測(cè)提供了重要的參考指標(biāo)。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結(jié)合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯(lián)1苯1胺(DAB)產(chǎn)生深棕色反應(yīng),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂,水稻RNA原位雜交檢測(cè)技術(shù)服務(wù),因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片)在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測(cè)。還可應(yīng)用于抗腫1瘤藥的藥1效評(píng)價(jià),以及通過雙色法確定細(xì)胞類型和分化階段。
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