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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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點對點酵母雙雜交驗證實驗流程
1、誘餌蛋白毒性及自激1活檢測；
2、共轉(zhuǎn)化：分別將誘餌/捕獲質(zhì)粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、陽性對照質(zhì)粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、陰性對照質(zhì)粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分別共轉(zhuǎn)到Y(jié)2H Gold感受態(tài)細(xì)胞中，涂布于DDO平板培養(yǎng)；
3、點板驗證：分別從平板上挑單克1隆稀釋10倍、100倍、1000倍，然后點板到TDO/X/A和QDO/X/A固體培養(yǎng)基進(jìn)行驗證；
4、實驗數(shù)據(jù)與報告整理。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
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第3年
