生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:
基因表達(dá)和調(diào)控研究:原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。例如,可以標(biāo)記特定基因的探針,湖北原位雜交,檢測該基因在不同環(huán)境、不同生長條件下的表達(dá)情況,進(jìn)而研究其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
細(xì)胞分化與發(fā)育研究:在細(xì)胞分化與發(fā)育研究中,原位雜交技術(shù)常被用于檢測和定位特定基因的表達(dá)情況,熒光原位雜交,進(jìn)而了解細(xì)胞分化的過程和機(jī)制。例如,可以標(biāo)記與細(xì)胞分化相關(guān)的基因探針,檢測該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。
植物組織原位雜交技術(shù)在植物基因表達(dá)和調(diào)控研究中具有廣泛的應(yīng)用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長、逆境響應(yīng)等方面的基因表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制。例如,可以利用該技術(shù)研究植物中的轉(zhuǎn)錄因子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、代謝途徑等基因的表達(dá)和調(diào)控。此外,植物組織原位雜交技術(shù)還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。
總之植物組織原位雜交技術(shù)是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù),可以用來研究植物基因的表達(dá)和調(diào)控。它具有操作簡便、結(jié)果可靠、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn),是植物分子生物學(xué)研究中不可或缺的工具。
以菌落原位雜交為例:對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行篩選時,可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后,對菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上,再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種(或打點(diǎn))。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
(3) 倒置平板,染色體原位雜交,于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
(6) 裂解細(xì)菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
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