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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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| 先生： |
水稻種子是人類重要的食物來源，其發(fā)育涉及一個復雜的調控網(wǎng)絡，其中轉錄因子發(fā)揮了關鍵作用。MADS轉錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調控因子，已有的研究表明，植物原位雜交檢測服務，幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達，但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調控的研究結果仍比較少。
在這項研究中，研究組基于前期的表達譜研究基礎，分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達的轉錄因子MADS29。細致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達，且在受精后的母體組織表達量高。MADS29的反義轉1基因植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學切片、末端轉移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示，MADS29能夠通過直接結合程序化死1亡相關基因的啟動子區(qū)域而調控其表達，進而影響胚乳發(fā)育。
原位雜交第三天
1） 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
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第4年
