將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過(guò)夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后,原位雜交技術(shù)咨詢(xún),去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時(shí)。此時(shí)已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括:
檢測(cè)物種或品種特異性:通過(guò)植物原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異,原位雜交,從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種:通過(guò)植物原位雜交技術(shù)可以檢測(cè)到不同品種之間基因表達(dá)的差異,原位雜交檢測(cè),從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如,通過(guò)將特定的外源基因?qū)氲街参锛?xì)胞中,原位雜交技術(shù)服務(wù),然后利用原位雜交技術(shù)檢測(cè)該基因在植物細(xì)胞中的位置和表達(dá)情況,為遺傳育種提供重要的參考信息。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù),它可以用來(lái)研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)DNA序列的互補(bǔ)性結(jié)合,通過(guò)熒光或性標(biāo)記來(lái)檢測(cè)目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標(biāo)記上熒光或性同位素,然后將其與目標(biāo)DNA序列進(jìn)行雜交。在雜交過(guò)程中,探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合,形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后,通過(guò)熒光或性同位素探測(cè)技術(shù),可以檢測(cè)到目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
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