將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或?qū)嶒炓髧?yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理,將標(biāo)記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結(jié)合,從而在細胞水平上檢測目標(biāo)核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補性,通過加熱或化學(xué)反應(yīng)使探針與組織或細胞中的目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物,進而實現(xiàn)目標(biāo)核酸序列的定位。
原位雜交的基本原理是利用標(biāo)記的核酸探針與細胞或組織中的DNA或RNA進行雜交,然后通過檢測標(biāo)記來識別探針的位置。這使得研究人員能夠在細胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達水平。
原位雜交可以用于多種類型的實驗。例如,它可以用來檢測特定基因在發(fā)育過程中的表達模式,或者確定特定基因變異在細胞中的分布。此外,原位雜交還可以用于診斷疾病,例如某些類型的,以及監(jiān)測效果。
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