將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,植物原位雜交,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴,湖北原位雜交,以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,原位雜交檢測,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或?qū)嶒炓髧栏竦南茨l件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學技術(shù),它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標DNA序列的互補性結(jié)合,通過熒光或性標記來檢測目標DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標記上熒光或性同位素,然后將其與目標DNA序列進行雜交。在雜交過程中,探針與目標DNA序列互補結(jié)合,形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后,通過熒光或性同位素探測技術(shù),可以檢測到目標DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
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