原位雜交技術(shù)的原理是什么?有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
預(yù)雜交
1)每個(gè)管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時(shí)以上。
雜交
1)吸去預(yù)雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,湖北原位雜交,探針結(jié)合越好,原位雜交公司,溫度越高,背景越小。
植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用,原位雜交技術(shù)服務(wù),還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:
植物基因研究:植物基因是一種利用基因工程技術(shù)來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術(shù),可以將人類基因?qū)氲街参锛?xì)胞中,熒光原位雜交技術(shù),并在植物細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì),為基因提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
植物抗性研究:植物原位雜交技術(shù)可以用于研究植物對(duì)環(huán)境脅迫的抗性機(jī)制,例如抗旱、抗鹽、抗病等,有助于了解植物在環(huán)境脅迫下的生理和分子響應(yīng)機(jī)制。
植物比較研究:通過植物原位雜交技術(shù)可以比較不同植物之間基因表達(dá)模式的差異,從而為植物分類和進(jìn)化研究提供重要的參考依據(jù)。
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