生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:
物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究:在物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究中,原位雜交檢測(cè),原位雜交技術(shù)可以用于檢測(cè)物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。例如,植物原位雜交,可以比較不同物種之間特定基因序列的差異,進(jìn)而研究它們的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。
原位雜交技術(shù)在基因表達(dá)和調(diào)控、細(xì)胞分化與發(fā)育、研究和物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,為深入探究生命現(xiàn)象、促進(jìn)生物技術(shù)的發(fā)展提供了有力的技術(shù)支持。
生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:
基因表達(dá)和調(diào)控研究:原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。例如,可以標(biāo)記特定基因的探針,檢測(cè)該基因在不同環(huán)境、不同生長(zhǎng)條件下的表達(dá)情況,進(jìn)而研究其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
細(xì)胞分化與發(fā)育研究:在細(xì)胞分化與發(fā)育研究中,原位雜交技術(shù)常被用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá)情況,進(jìn)而了解細(xì)胞分化的過程和機(jī)制。例如,可以標(biāo)記與細(xì)胞分化相關(guān)的基因探針,檢測(cè)該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
原位雜交技術(shù)的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序,通過堿基對(duì)之間非共價(jià)鍵的形成,出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū),形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結(jié)合,湖北原位雜交,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P,染色體原位雜交,熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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