亞細胞定位是查找生物大分子在細胞內(nèi)的具體存在的位置,如在核內(nèi)、胞質(zhì)內(nèi)或者細胞膜上存在。常見的亞細胞定位方法有生物信息學預測法、熒光法、GFP融合蛋白表達法。
熒光顯微鏡技術是一種非常有用的工具,湖北亞細胞定位,可以幫助我們了解植物細胞中不同細胞器的位置和功能。通過使用不同的標記物,我們可以定位許多其他細胞器,亞細胞定位服務,例如核糖體、囊泡和細胞壁。這些信息對于研究植物細胞的生物學過程和開發(fā)新的農(nóng)業(yè)技術都非常重要。
蛋白質(zhì)序列特征:
利用改進型偽氨基酸組成法(PseAAC)、偽位置特異性得分矩陣法(PsePSSM)和三聯(lián)體編碼法(CT)對蛋白質(zhì)序列進行特征提取,洋蔥亞細胞定位,并將這三種方法得到的特征向量進行融合,以得到一個全新的蛋白質(zhì)序列特征表達模型,然后輸入到堆棧式降噪自編碼器(SDAE)深度網(wǎng)絡里自動學習更有效的特征表示,選用 Softmax 回歸分類器進行亞細胞的分類預測,可有效提高蛋白質(zhì)亞細胞定位預測的準確性。
利用 PSI-BLAST 工具搜索蛋白質(zhì)序列,提取位點特異性譜中的位點特異性得分矩陣作為蛋白質(zhì)的一類特征,并計算 4 等分序列的氨基酸含量以及 1~7 階二肽含量作為另外兩類特征,由這三類特征一共得到蛋白質(zhì)序列的 12 個特征向量。通過設計一個簡單加權函數(shù)對各類特征向量加權處理,作為神經(jīng)網(wǎng)絡預測器的輸入,可提高蛋白質(zhì)亞細胞定位預測的精度。
GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發(fā)出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質(zhì)的位置。綠色螢光蛋白(GFP)是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質(zhì),從藍光到紫外線都能使其激發(fā),發(fā)出綠色熒光。通過基因工程技術,綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組,在后代中持續(xù)表達,亞細胞定位方法,并且能根據(jù)啟動子特異性地表達。
使用GFP必須構建融合蛋白載體,并在轉染之后有效表達。這樣,若在熒光顯微鏡下看到細胞內(nèi)某一部位存在GFP信號,說明和GFP融合的蛋白也存在于該部位,這樣就達到了確定某物質(zhì)亞細胞定位的目的。
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