植物原位雜交在遺傳育種方面的應用主要包括:
異源染色質及多種染色體畸變檢測:通過遠緣雜交把有用遺傳物質基因的異源染色質漸滲到植物中。如帶有幾種抗病基因的黑麥1R染色體已被整合到許多高產的小麥品種中。原位雜交技術則是鑒定外源染色體(質)的有效手段。
基因組印記研究:基因組印記是指一個基因的兩條染色體上的DNA序列存在差異。通過植物原位雜交技術,可以檢測到基因組印記的存在和分布,植物原位雜交,從而幫助確定基因組的進化、遺傳和功能特征。
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學技術和原位雜交細胞化學技術
原位雜交技術的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩(wěn)定的雙鏈區(qū),形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應用帶有標記的(有性同位素,熒光原位雜交,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
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