人marrow細(xì)胞的三維灌注培養(yǎng)和骨誘導(dǎo)移植物的產(chǎn)生
Abstract
三維 (3D) 培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)于研究細(xì)胞生理學(xué)和設(shè)計(jì)組織移植物至關(guān)重要。在這項(xiàng)研究中,我們描述了一種簡(jiǎn)單而創(chuàng)新的基于生物反應(yīng)器的方法,可以直接在 3D 環(huán)境中播種、擴(kuò)增和分化marrow基質(zhì)細(xì)胞 (BMSCs),繞過(guò)傳統(tǒng)的單層過(guò)程(二維 [2D])擴(kuò)張。該系統(tǒng)基于通過(guò)多孔 3D 支架灌注marrow有核細(xì)胞,支持基質(zhì)樣組織的形成,進(jìn)口組織工程軟骨實(shí)驗(yàn)生物反應(yīng)器報(bào)價(jià),其中 BMSC 可以與造血祖細(xì)胞共培養(yǎng),其比例取決于特定的培養(yǎng)基補(bǔ)充劑。由此產(chǎn)生的工程構(gòu)建體,當(dāng)異位植入裸鼠體內(nèi)時(shí),產(chǎn)生的骨組織比裝載二維擴(kuò)展 BMSCs 的支架更可重復(fù)、更均勻和更廣泛。因此,開(kāi)發(fā)的系統(tǒng)可用作marrow的 3D 體外模型,以研究 BMSC 和造血細(xì)胞之間的相互作用,組織工程軟骨實(shí)驗(yàn)生物反應(yīng)器報(bào)價(jià),以及在再生醫(yī)學(xué)的背景下簡(jiǎn)化骨誘導(dǎo)移植物的制造。
灌注和動(dòng)態(tài)負(fù)荷對(duì)海藻酸鹽水凝膠中人新軟骨形成的影響組織工程軟骨實(shí)驗(yàn)生物反應(yīng)器報(bào)價(jià)
已知單獨(dú)的動(dòng)態(tài)加載和灌注培養(yǎng)環(huán)境可增強(qiáng)去分化關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中軟骨細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 的產(chǎn)生。在這項(xiàng)研究中,我們探討了這些因素的組合是否會(huì)在使用嵌入 2% 藻酸鹽的成人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的自由腫脹 (FS) 條件下增強(qiáng)這些過(guò)程。每天將藻酸鹽構(gòu)建體放入生物反應(yīng)器中僅用于灌注(P)(100 μL/每分鐘)或灌注和動(dòng)態(tài)壓縮負(fù)荷(PL)培養(yǎng)(20% 1 小時(shí),0.5 Hz)。對(duì)照 FS 藻酸鹽凝膠保持在六孔靜態(tài)培養(yǎng)中?;虮磉_(dá)分析在地 7 天和地 14 天進(jìn)行,而細(xì)胞活力、免疫染色和機(jī)械性能測(cè)試僅在地14 天進(jìn)行。在地 7 天和地 14 天,與 FS 相比,兩種生物反應(yīng)器條件下的Col2a1 mRNA 表達(dá)水平顯著更高(至少三倍;p < 0.05)。對(duì)于所有基因研究,P 和 PL 處理之間沒(méi)有顯著差異。盡管 GAG/DNA和35S GAG 摻入研究表明在 FS 處理中 GAG 保留和合成更高。所有樣品中 II 型膠原蛋白沉積均較低,連接蛋白分布在 FS 條件下更分散,并且在兩種生物反應(yīng)器條件下,進(jìn)口代理組織工程軟骨實(shí)驗(yàn)生物反應(yīng)器報(bào)價(jià),蛋白聚糖沉積位于藻酸鹽構(gòu)建體的外部區(qū)域,代理組織工程軟骨實(shí)驗(yàn)生物反應(yīng)器報(bào)價(jià),但在 FS 條件下更均勻。與 FS 相比,生物反應(yīng)器條件下的分解代謝基因表達(dá)(基質(zhì)金屬蛋白酶 3 [ MMP3 ] 和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 [ iNOS ])高于 FS,盡管iNOS到地14 天,表達(dá)水平下降到比 FS 條件低約四倍。我們的數(shù)據(jù)表明,在生物反應(yīng)器中創(chuàng)建的條件增強(qiáng)了合成代謝和分解代謝反應(yīng),類(lèi)似于其他加載研究。單獨(dú)灌注就足以促進(jìn)這種雙重反應(yīng)。與其他條件相比,PL 增加了聚集蛋白聚糖周?chē)?xì)胞的沉積;然而,生物反應(yīng)器系統(tǒng)中的總體低 GAG 保留可能是由于產(chǎn)生了灌注和分解代謝條件。需要Z佳條件,允許適當(dāng)?shù)暮铣纱x和分解代謝過(guò)程用于積累 ECM 和組織重塑以促進(jìn)新軟骨發(fā)育,特別是對(duì)人類(lèi)而言。
三維軟骨細(xì)胞培養(yǎng)機(jī)械牽拉應(yīng)力加載刺激系統(tǒng)
TC-3是一個(gè)簡(jiǎn)單的和多用途的細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)各種樣品和組織,以提供機(jī)械刺激。: 水平和垂直方向排列的多個(gè)樣品浸泡和空氣 - 液體界面設(shè)置不同的培養(yǎng)形狀拉伸和壓縮軸向載荷 智能設(shè)計(jì)TC-3的生物反應(yīng)器,可以進(jìn)行拉伸和壓縮機(jī)械刺激對(duì)培養(yǎng)基板。它已被設(shè)計(jì)同時(shí)考慮到細(xì)胞培養(yǎng)研究人員的需求,因此,只有張力刺激的功能的細(xì)胞培養(yǎng)是已經(jīng)被包含。 其中,可以用顯微鏡實(shí)時(shí)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)觀(guān)測(cè)的技術(shù),對(duì)于細(xì)胞狀況的評(píng)價(jià)是非常重要的。TC-3的培養(yǎng)艙,它重量輕,所有的接觸的部件可以在高壓滅菌條件下進(jìn)行消毒。
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