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原位雜交服務-貝科新肽(在線咨詢)-原位雜交

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RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內(nèi)RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:在細胞或組織結(jié)構保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,原位雜交,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體(Hybrids)經(jīng)顯色反應后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內(nèi)相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術經(jīng)不斷改進,其應用的領域已遠超出DNA原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已成為有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

FISH技術的基本步驟包括探針制備、樣品預處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標記物代替同位素標記物來標記探針。在樣品預處理過程中,熒光原位雜交技術,細胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,以提高探針與目標序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標序列進行互補性雜交,原位雜交服務,形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細胞圖像。

菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。

(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。

(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。

(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。

(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。

(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。

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