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湖北熒光原位雜交-貝科新肽

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FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標記物代替同位素標記物來標記探針。在樣品預(yù)處理過程中,細胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,以提高探針與目標序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標序列進行互補性雜交,形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細胞圖像。

①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,熒光原位雜交,基因表達和基因組進化的研究;②組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測;④基因在染色體上的定位;⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;⑥分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些的診斷和生物學(xué)劑量測定等。

這一原理對于檢測一個特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個細胞里具體表達位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細胞內(nèi)RNA進行雜交以觀察該組織細胞中特定基因表達水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對于那些細胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細胞的形態(tài),更能準確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

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